1. 天冬氨酸酶活性中心含有保守的丝氨酸残基，作为广义碱从底物 C3 位抽取质子。
2. Mg²⁺ 离子同时配位底物的两个羧基，稳定反应中间体。
3. 质子被抽取后形成烯二醇中间体，负电荷通过共轭体系离域。
4. C-N 键随后断裂，释放出氨分子，生成产物延胡索酸。
5. 整个消除过程为反式消除，符合 E1cb-like 机理。