丝氨酸肽酶的催化循环
Ser–His–Asp 三联体 · 四步机制（以胰凝乳蛋白酶为例）
丝氨酸肽酶催化循环四步机制
展示米氏复合物、四面体中间体、酰基酶复合物与水解再生四个连续状态，强调催化三联体电荷变化与氧负离子洞的稳定作用。
丝氨酸肽酶催化循环（四步机制）
① 米氏复合物
活性口袋
Ser
–OH
His
Asp
C=O · NH
肽键
R
R'
底物进入口袋
② 四面体中间体
氧负离子洞
O⁻
C
Ser
NH-R'
R
His⁺
Ser-O⁻ 亲核攻击
羰基 C → sp³
高能过渡态
③ 酰基酶复合物
Ser
C=O
R
H₂N-R'
（胺产物离开）
His
C–N 键断裂
共价酰基酶
④ 水解再生
H₂O
Ser
–OH
R-COOH
（酸产物）
His
Asp
H₂O 亲核进攻
酶完全再生
催化三联体
Ser
–
His
–
Asp
· 速率决定步：
酰基酶形成
同一酰基底物 → 同一酰基酶中间体（与离去基团无关）
① 米氏复合物
底物结合
→
② 四面体中间体
氧负离子洞稳定
→
③ 酰基酶
胺产物释放
→
④ 水解再生
酸产物释放
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