肽酰胺酶的C端精准切割
PAM / PAF 只切断 C 端酰胺键,对内部肽键与侧链酰胺键"视而不见"
肽酰胺酶对多肽C端酰胺键的特异性切割
示意一条多肽链,PAM只在C端酰胺键处切割,内部肽键与Asn/Gln侧链酰胺键不被水解。
PAM 切割位点识别
Ala
N端
Gly
Asn
-CONH₂
Leu
Gln
-CONH₂
Phe
-NH₂
C端酰胺
内部肽键
PAM ✂
识别规则:
✓ 只切 C 端 -CONH₂
✗ 不切内部肽键
✗ 不切 Asn/Gln 侧链
✗ 大体积 β-分支侧链 (Val, Ile, t-Leu) 在 C 端时几乎不反应
PAF
(橙子皮来源)与
PAM
(
Stenotrophomonas maltophilia
来源)底物谱几乎相同,都是
L-立体选择性
的 C 端脱酰胺酶。
工业痛点
:PAF 糖基化多样、基因难克隆;PAM 可在
E. coli
Origami 中高效表达(占可溶蛋白 31%)。
His 标签
便于纯化。
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