肽酰胺酶的C端精准切割
PAM / PAF 只切断 C 端酰胺键,对内部肽键与侧链酰胺键"视而不见"
肽酰胺酶对多肽C端酰胺键的特异性切割 示意一条多肽链,PAM只在C端酰胺键处切割,内部肽键与Asn/Gln侧链酰胺键不被水解。 PAM 切割位点识别 Ala N端 Gly Asn -CONH₂ Leu Gln -CONH₂ Phe -NH₂ C端酰胺 内部肽键 PAM ✂ 识别规则: ✓ 只切 C 端 -CONH₂ ✗ 不切内部肽键 ✗ 不切 Asn/Gln 侧链 ✗ 大体积 β-分支侧链 (Val, Ile, t-Leu) 在 C 端时几乎不反应
PAF(橙子皮来源)与 PAMStenotrophomonas maltophilia 来源)底物谱几乎相同,都是 L-立体选择性 的 C 端脱酰胺酶。
工业痛点:PAF 糖基化多样、基因难克隆;PAM 可在 E. coli Origami 中高效表达(占可溶蛋白 31%)。His 标签便于纯化。
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