从发酵液到粗酶制剂

胞外酶与胞内酶的两条提取路线

① 发酵培养基配制与灭菌

→

② 逐级接种
摇瓶 → 种子罐 → 主罐

🟢 胞外酶路线

过滤/离心 → 超滤浓缩 → 溶剂沉淀 → 干燥

🟡 胞内酶路线

收集菌体 → 破碎 → 缓冲液抽提

· 机械法：Dynamill + 玻璃珠（100 L/h）
· 酶解法：溶菌酶（室温搅拌数小时）
· 冻融辅助：冻结前加溶菌酶

🔴 包涵体处理（E. coli 重组酶常见难题）

盐酸胍/尿素 + 还原剂溶解 → 去除变性剂 → 蛋白复性恢复活性构象

最终产物：粗酶制剂 → 进入层析纯化阶段